1.項目背景
組織型纖溶酶原激活物-纖溶酶原激活抑制物-1復合物 (tissue plasminogen activator-plasminogen activator inhibitor-1 complex，tPAI.C):tPAI.C是血管內(nèi)皮細胞損傷時，釋放t-PA與PAI-1共同入血形成的復合物。tPAI.C的正常值根據(jù)性別有不同，男性血漿正常值<17.0 ng/mL，女性<10.5 ng/mL。理論上tPAI.C是內(nèi)皮損傷及纖溶系統(tǒng)激活的產(chǎn)物，臨床研究中發(fā)現(xiàn)tPAI.C對休克嚴重狀態(tài)特別是膿毒癥休克的診斷價值很高。
血液中t-PA?PAI-1抗原量反映了釋放于血液中的t-PA的量，因此針對t-PA增加的病態(tài)，就結(jié)果而言其t-PA?PAI-1復合物也會增加釋放于血液中的t-PA會將纖溶酶原激活為纖溶酶，因此可將t-PA?PAI-1復合物作為纖溶系統(tǒng)的分子標志物，PIC的增加代表著纖溶系統(tǒng)最終階段的纖溶酶的生成，相對于此，t-PA?PAI-1復合物的增加并不一定意味著纖溶亢進。
血管內(nèi)皮細胞受損后，t-PA會與PAI-1一同釋放于血液中，因此可認為t-PA?PAI-1復合物的上升也反映了血管受損。動靜脈血栓的存在、炎性細胞因子和內(nèi)毒素帶來的刺激，會引發(fā)大范圍血管病變的代謝性疾病等現(xiàn)象均易引起t-PA?PAI-1復合物上升。有報告指出，在并發(fā)有多器官功能衰竭的彌散性血管內(nèi)凝血中，病程中血中t-PA?PAI-1復合物呈高值的病例絕大多數(shù)預后不佳。下圖是tPAI.C的作用機制。
2. 性能表現(xiàn)
針對tPAI.C的檢測，西寶生物推出5種單克隆抗體及1種抗原。具體性能如下（以下評估僅代表在西寶生物的工藝體系下的驗證，建議客戶根據(jù)自身工藝進行更為詳細的驗證）
2.1化學發(fā)光（AE）平臺
組合1：Anti tPAI.C antibody（貨號：EKY1204A）包被羧基磁珠+Anti tPAI.C antibody（貨號：EKY1205A）標記吖啶酯；
線性范圍：1 ng/mL-100 ng/mL；最低檢出限：1 ng/mL。
組合2：Anti tPAI.C antibody（貨號：EKY1204A）包被羧基磁珠+Anti tPAI.C antibody（貨號：EKY1204B）標記吖啶酯；
線性范圍：1 ng/mL-100 ng/mL；最低檢出限：1 ng/mL。
2.2化學發(fā)光（AP）平臺
組合3：Anti tPAI.C antibody（貨號：EKY1204C）包被羧基磁珠+Anti tPAI.C antibody（貨號：EKY1205C）標記堿性磷酸酶；
線性范圍：1 ng/mL-100 ng/mL；最低檢出限：1 ng/mL。
2.3穩(wěn)定性評估
2.3.1 tPAI.C抗原穩(wěn)定性
采用磁珠標記物稀釋液（貨號：DCD0532A）將tPAI.C抗原（貨號：EDD0796B）稀釋成5個梯度（液體型），進行37℃熱穩(wěn)定性實驗。如表1所示，tPAI.C抗原稀釋梯度（液體型）37℃熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發(fā)光值平均變化在±10%以內(nèi)，表明tPAI.C抗原稀釋梯度（液體型）熱穩(wěn)定性良好。
表1 tPAI.C抗原稀釋梯度（液體型）熱穩(wěn)定性7天數(shù)據(jù)
序號 | tPAI.C 抗原稀釋濃度濃度ng/mL | tPAI.C 抗原稀釋梯度（液體型）2℃-8℃儲存7天發(fā)光值均值 | tPAI.C 抗原稀釋梯度（液體型）37℃熱加速7天發(fā)光值均值 | tPAI.C 抗原稀釋梯度（液體型）37℃熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發(fā)光值均值差異 |
S0 | 0 | 17053 | 17591 | 3.2% |
S1 | 1 | 157554 | 149224 | -5.3% |
S2 | 5 | 640325 | 625343 | -2.3% |
S3 | 12.5 | 1536860 | 1473164 | -4.1% |
S4 | 50 | 6238834 | 5723227 | -8.3% |
S5 | 100 | 11871700 | 11114161 | -6.4% |
平均變化（不含S0） | -5.3% | |||
2.3.2 AP體系試劑穩(wěn)定性
采用磁珠標記物稀釋液（貨號：DCD0532A）將Anti tPAI.C antibody（貨號：EKY1204C）包被羧基磁珠濃縮液稀釋成工作液，進行37℃熱穩(wěn)定性實驗；采用堿性磷酸酶（ALP）標記物稀釋液（貨號：DCD0533A）將Anti tPAI.C antibody（貨號：EKY1205C）標記堿性磷酸酶濃縮液稀釋成工作液，進行37℃熱穩(wěn)定性實驗。如表2所示：
a.tPAI.C磁珠工作液單獨37℃熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發(fā)光值平均變化為-1.6%，在±10%以內(nèi)（不含S0），表明tPAI.C磁珠工作液熱穩(wěn)定性良好；
b.tPAI.C堿性磷酸酶工作液單獨37℃熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發(fā)光值平均變化為-9.1%，在±10%左右（不含S0），表明tPAI.C堿性磷酸酶工作液熱穩(wěn)定性較好。
c.tPAI.C全試劑工作液單獨37℃熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發(fā)光值平均變化為-13.6%，在±15%左右（不含S0），表明tPAI.C試劑熱穩(wěn)定性較好。
表2 tPAI.C試劑熱穩(wěn)定性7天數(shù)據(jù)
序號 | tPAI.C 抗原稀釋梯度濃度（ng/mL） | 磁珠工作液37℃熱加速7天偏差 | 堿磷酶工作液37℃熱加速7天偏差 | 全試劑工作液37℃熱加速7天偏差 |
S0 | 0 | -8.2% | -5.9% | -9.4% |
S1 | 1 | -4.4% | -9.7% | -13.1% |
S2 | 5 | -2.5% | -10.9% | -13.4% |
S3 | 12.5 | -0.5% | -8.5% | -14.1% |
S4 | 50 | -0.4% | -9.1% | -14.2% |
S5 | 100 | -0.2% | -7.4% | -13.3% |
平均變化（不含S0） | -1.6% | -9.1% | -13.6% | |
3.臨床相關(guān)性
3.1化學發(fā)光（AE）平臺
西寶tPAI.C抗體配對組合1（＜20 ng/mL）的發(fā)光值與希森美康 tPAI.C發(fā)光試劑臨床相關(guān)性R2>0.92。
西寶tPAI.C抗體配對組合1（＜100 ng/mL）的發(fā)光值與希森美康 tPAI.C發(fā)光試劑臨床相關(guān)性R2在0.95左右。
西寶tPAI.C抗體配對組合2（＜20 ng/mL）的發(fā)光值與希森美康 tPAI.C發(fā)光試劑臨床相關(guān)性R2>0.92。
西寶tPAI.C抗體配對組合2（＜100 ng/mL）的發(fā)光值與希森美康 tPAI.C發(fā)光試劑臨床相關(guān)性R2在0.95左右。
3.2化學發(fā)光（AP）平臺
西寶tPAI.C抗體配對組合3的發(fā)光值與希森美康 tPAI.C發(fā)光試劑臨床相關(guān)性R2在0.95左右。
4. 測試方案
4.1化學發(fā)光（AE）平臺抗體配對組合1
待測抗原：tPAI.C抗原（貨號：EDD0796B）
樣本/校準品:加樣量10ul；
試劑1：Anti tPAI.C antibody（貨號：EKY1204A）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；
試劑2：Anti tPAI.C antibody（貨號：EKY1205A）標記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測試；
反應條件：
第一步：10ul樣本+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入預激發(fā)液及激發(fā)液，進行測試。
測試使用發(fā)光儀器:科斯邁SMART 500S。
4.2化學發(fā)光（AE）平臺抗體配對組合2
樣本/校準品:加樣量50ul；
試劑1：Anti tPAI.C antibody（貨號：EKY1204A）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；
試劑2：Anti tPAI.C antibody（貨號：EKY1204B）標記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測試；
反應條件：
第一步：50ul樣本 + 50ul試劑1 + 50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入預激發(fā)液及激發(fā)液，進行測試。
測試使用發(fā)光儀器:科斯邁SMART 500S。
4.3化學發(fā)光（AP）平臺抗體配對組合3
待測抗原：tPAI.C抗原（貨號：EDD0796B）
樣本/校準品:加樣量5ul；
試劑1：Anti tPAI.C antibody（貨號：EKY1204C）包被-磁珠稀釋物，用量100ul/測試；
試劑2：Anti tPAI.C antibody（貨號：EKY1205C）標記-堿性磷酸酶稀釋物，用量100ul/測試；
反應條件：
第一步：5ul樣品 + 100ul試劑1，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入100ul試劑2，37℃孵育10min，清洗；
第三步：加入底物，進行測試。
測試使用發(fā)光儀器:迎凱Shine i2900。
5.產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 推薦配對 |
纖溶酶原激活物抑制劑-I(PAI)抗體 | EKY1205A | 組織型纖溶酶原激活物（t-PA）抗體（貨號：EKY1204A）包被羧基磁珠+纖溶酶原激活物抑制劑-I(PAI)抗體（貨號：EKY1205A）標記吖啶酯 （發(fā)光兩試劑配對組合1） 組織型纖溶酶原激活物（t-PA）抗體（貨號：EKY1204A）包被羧基磁珠+纖溶酶原激活物抑制劑-I(PAI)抗體（貨號：EKY1204B）標記吖啶酯 （發(fā)光兩試劑配對組合2） |
組織型纖溶酶原激活物（t-PA）抗體 | EKY1204A | |
纖溶酶原激活物抑制劑-I(PAI)抗體 | EKY1204B | |
抗纖溶酶原激活物抑制劑-1復合物（tPAI.C）抗體 | EKY1204C | 纖溶酶原激活物抑制劑-1復合物（tPAI.C）抗體（貨號：EKY1204C）包被羧基磁珠+纖溶酶原激活物抑制劑-1復合物（tPAI.C）抗體（貨號：EKY1205C）標記堿性磷酸酶 （發(fā)光兩試劑配對組合3） |
抗纖溶酶原激活物抑制劑-1復合物（tPAI.C）抗體 | EKY1205C | |
組織纖溶酶原激活物-纖溶酶原激活物抑制劑-1復合物（tPAI.C）抗原 | EDD0796B | |
組織型纖溶酶原激活物（t-PA）抗體（貨號：EKY1204A）-羧基磁珠濃縮液 | DKY1328A | |
纖溶酶原激活物抑制劑-I(PAI)抗體（貨號：EKY1205A）-吖啶酯濃縮液 | DKY1328B | |
纖溶酶原激活物抑制劑-I(PAI)抗體（貨號：EKY1204B）-吖啶酯濃縮液 | DKY1328C | |
組織型纖溶酶原激活物抗體（貨號：）-羧基磁珠濃縮液 | DKY1328D | |
組織型纖溶酶原激活物抗體（貨號：）-堿性磷酸酶濃縮液 | DKY1328E | |
羧基磁性微球，1.2μm | DEG0800D | |
AMPPD 發(fā)光底物液（即用型） | DCD0517B | |
重組堿性磷酸酶（高活性） | DCE0108L | |
磁珠標記物稀釋液（化學發(fā)光） | DCD0532A | |
堿性磷酸酶（ALP）標記物稀釋液（化學發(fā)光） | DCD0533A |
1.項目背景
組織型纖溶酶原激活物-纖溶酶原激活抑制物-1復合物 (tissue plasminogen activator-plasminogen activator inhibitor-1 complex，tPAI.C):tPAI.C是血管內(nèi)皮細胞損傷時，釋放t-PA與PAI-1共同入血形成的復合物。tPAI.C的正常值根據(jù)性別有不同，男性血漿正常值<17.0 ng/mL，女性<10.5 ng/mL。理論上tPAI.C是內(nèi)皮損傷及纖溶系統(tǒng)激活的產(chǎn)物，臨床研究中發(fā)現(xiàn)tPAI.C對休克嚴重狀態(tài)特別是膿毒癥休克的診斷價值很高。
血液中t-PA?PAI-1抗原量反映了釋放于血液中的t-PA的量，因此針對t-PA增加的病態(tài)，就結(jié)果而言其t-PA?PAI-1復合物也會增加釋放于血液中的t-PA會將纖溶酶原激活為纖溶酶，因此可將t-PA?PAI-1復合物作為纖溶系統(tǒng)的分子標志物，PIC的增加代表著纖溶系統(tǒng)最終階段的纖溶酶的生成，相對于此，t-PA?PAI-1復合物的增加并不一定意味著纖溶亢進。
血管內(nèi)皮細胞受損后，t-PA會與PAI-1一同釋放于血液中，因此可認為t-PA?PAI-1復合物的上升也反映了血管受損。動靜脈血栓的存在、炎性細胞因子和內(nèi)毒素帶來的刺激，會引發(fā)大范圍血管病變的代謝性疾病等現(xiàn)象均易引起t-PA?PAI-1復合物上升。有報告指出，在并發(fā)有多器官功能衰竭的彌散性血管內(nèi)凝血中，病程中血中t-PA?PAI-1復合物呈高值的病例絕大多數(shù)預后不佳。下圖是tPAI.C的作用機制。
2. 性能表現(xiàn)
針對tPAI.C的檢測，西寶生物推出5種單克隆抗體及1種抗原。具體性能如下（以下評估僅代表在西寶生物的工藝體系下的驗證，建議客戶根據(jù)自身工藝進行更為詳細的驗證）
2.1化學發(fā)光（AE）平臺
組合1：Anti tPAI.C antibody（貨號：EKY1204A）包被羧基磁珠+Anti tPAI.C antibody（貨號：EKY1205A）標記吖啶酯；
線性范圍：1 ng/mL-100 ng/mL；最低檢出限：1 ng/mL。
組合2：Anti tPAI.C antibody（貨號：EKY1204A）包被羧基磁珠+Anti tPAI.C antibody（貨號：EKY1204B）標記吖啶酯；
線性范圍：1 ng/mL-100 ng/mL；最低檢出限：1 ng/mL。
2.2化學發(fā)光（AP）平臺
組合3：Anti tPAI.C antibody（貨號：EKY1204C）包被羧基磁珠+Anti tPAI.C antibody（貨號：EKY1205C）標記堿性磷酸酶；
線性范圍：1 ng/mL-100 ng/mL；最低檢出限：1 ng/mL。
2.3穩(wěn)定性評估
2.3.1 tPAI.C抗原穩(wěn)定性
采用磁珠標記物稀釋液（貨號：DCD0532A）將tPAI.C抗原（貨號：EDD0796B）稀釋成5個梯度（液體型），進行37℃熱穩(wěn)定性實驗。如表1所示，tPAI.C抗原稀釋梯度（液體型）37℃熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發(fā)光值平均變化在±10%以內(nèi)，表明tPAI.C抗原稀釋梯度（液體型）熱穩(wěn)定性良好。
表1 tPAI.C抗原稀釋梯度（液體型）熱穩(wěn)定性7天數(shù)據(jù)
序號 | tPAI.C 抗原稀釋濃度濃度ng/mL | tPAI.C 抗原稀釋梯度（液體型）2℃-8℃儲存7天發(fā)光值均值 | tPAI.C 抗原稀釋梯度（液體型）37℃熱加速7天發(fā)光值均值 | tPAI.C 抗原稀釋梯度（液體型）37℃熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發(fā)光值均值差異 |
S0 | 0 | 17053 | 17591 | 3.2% |
S1 | 1 | 157554 | 149224 | -5.3% |
S2 | 5 | 640325 | 625343 | -2.3% |
S3 | 12.5 | 1536860 | 1473164 | -4.1% |
S4 | 50 | 6238834 | 5723227 | -8.3% |
S5 | 100 | 11871700 | 11114161 | -6.4% |
平均變化（不含S0） | -5.3% | |||
2.3.2 AP體系試劑穩(wěn)定性
采用磁珠標記物稀釋液（貨號：DCD0532A）將Anti tPAI.C antibody（貨號：EKY1204C）包被羧基磁珠濃縮液稀釋成工作液，進行37℃熱穩(wěn)定性實驗；采用堿性磷酸酶（ALP）標記物稀釋液（貨號：DCD0533A）將Anti tPAI.C antibody（貨號：EKY1205C）標記堿性磷酸酶濃縮液稀釋成工作液，進行37℃熱穩(wěn)定性實驗。如表2所示：
a.tPAI.C磁珠工作液單獨37℃熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發(fā)光值平均變化為-1.6%，在±10%以內(nèi)（不含S0），表明tPAI.C磁珠工作液熱穩(wěn)定性良好；
b.tPAI.C堿性磷酸酶工作液單獨37℃熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發(fā)光值平均變化為-9.1%，在±10%左右（不含S0），表明tPAI.C堿性磷酸酶工作液熱穩(wěn)定性較好。
c.tPAI.C全試劑工作液單獨37℃熱加速7天與2℃-8℃儲存7天發(fā)光值平均變化為-13.6%，在±15%左右（不含S0），表明tPAI.C試劑熱穩(wěn)定性較好。
表2 tPAI.C試劑熱穩(wěn)定性7天數(shù)據(jù)
序號 | tPAI.C 抗原稀釋梯度濃度（ng/mL） | 磁珠工作液37℃熱加速7天偏差 | 堿磷酶工作液37℃熱加速7天偏差 | 全試劑工作液37℃熱加速7天偏差 |
S0 | 0 | -8.2% | -5.9% | -9.4% |
S1 | 1 | -4.4% | -9.7% | -13.1% |
S2 | 5 | -2.5% | -10.9% | -13.4% |
S3 | 12.5 | -0.5% | -8.5% | -14.1% |
S4 | 50 | -0.4% | -9.1% | -14.2% |
S5 | 100 | -0.2% | -7.4% | -13.3% |
平均變化（不含S0） | -1.6% | -9.1% | -13.6% | |
3.臨床相關(guān)性
3.1化學發(fā)光（AE）平臺
西寶tPAI.C抗體配對組合1（＜20 ng/mL）的發(fā)光值與希森美康 tPAI.C發(fā)光試劑臨床相關(guān)性R2>0.92。
西寶tPAI.C抗體配對組合1（＜100 ng/mL）的發(fā)光值與希森美康 tPAI.C發(fā)光試劑臨床相關(guān)性R2在0.95左右。
西寶tPAI.C抗體配對組合2（＜20 ng/mL）的發(fā)光值與希森美康 tPAI.C發(fā)光試劑臨床相關(guān)性R2>0.92。
西寶tPAI.C抗體配對組合2（＜100 ng/mL）的發(fā)光值與希森美康 tPAI.C發(fā)光試劑臨床相關(guān)性R2在0.95左右。
3.2化學發(fā)光（AP）平臺
西寶tPAI.C抗體配對組合3的發(fā)光值與希森美康 tPAI.C發(fā)光試劑臨床相關(guān)性R2在0.95左右。
4. 測試方案
4.1化學發(fā)光（AE）平臺抗體配對組合1
待測抗原：tPAI.C抗原（貨號：EDD0796B）
樣本/校準品:加樣量10ul；
試劑1：Anti tPAI.C antibody（貨號：EKY1204A）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；
試劑2：Anti tPAI.C antibody（貨號：EKY1205A）標記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測試；
反應條件：
第一步：10ul樣本+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入預激發(fā)液及激發(fā)液，進行測試。
測試使用發(fā)光儀器:科斯邁SMART 500S。
4.2化學發(fā)光（AE）平臺抗體配對組合2
樣本/校準品:加樣量50ul；
試劑1：Anti tPAI.C antibody（貨號：EKY1204A）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測試；
試劑2：Anti tPAI.C antibody（貨號：EKY1204B）標記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測試；
反應條件：
第一步：50ul樣本 + 50ul試劑1 + 50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入預激發(fā)液及激發(fā)液，進行測試。
測試使用發(fā)光儀器:科斯邁SMART 500S。
4.3化學發(fā)光（AP）平臺抗體配對組合3
待測抗原：tPAI.C抗原（貨號：EDD0796B）
樣本/校準品:加樣量5ul；
試劑1：Anti tPAI.C antibody（貨號：EKY1204C）包被-磁珠稀釋物，用量100ul/測試；
試劑2：Anti tPAI.C antibody（貨號：EKY1205C）標記-堿性磷酸酶稀釋物，用量100ul/測試；
反應條件：
第一步：5ul樣品 + 100ul試劑1，37℃孵育10min，清洗；
第二步：加入100ul試劑2，37℃孵育10min，清洗；
第三步：加入底物，進行測試。
測試使用發(fā)光儀器:迎凱Shine i2900。
5.產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 推薦配對 |
纖溶酶原激活物抑制劑-I(PAI)抗體 | EKY1205A | 組織型纖溶酶原激活物（t-PA）抗體（貨號：EKY1204A）包被羧基磁珠+纖溶酶原激活物抑制劑-I(PAI)抗體（貨號：EKY1205A）標記吖啶酯 （發(fā)光兩試劑配對組合1） 組織型纖溶酶原激活物（t-PA）抗體（貨號：EKY1204A）包被羧基磁珠+纖溶酶原激活物抑制劑-I(PAI)抗體（貨號：EKY1204B）標記吖啶酯 （發(fā)光兩試劑配對組合2） |
組織型纖溶酶原激活物（t-PA）抗體 | EKY1204A | |
纖溶酶原激活物抑制劑-I(PAI)抗體 | EKY1204B | |
抗纖溶酶原激活物抑制劑-1復合物（tPAI.C）抗體 | EKY1204C | 纖溶酶原激活物抑制劑-1復合物（tPAI.C）抗體（貨號：EKY1204C）包被羧基磁珠+纖溶酶原激活物抑制劑-1復合物（tPAI.C）抗體（貨號：EKY1205C）標記堿性磷酸酶 （發(fā)光兩試劑配對組合3） |
抗纖溶酶原激活物抑制劑-1復合物（tPAI.C）抗體 | EKY1205C | |
組織纖溶酶原激活物-纖溶酶原激活物抑制劑-1復合物（tPAI.C）抗原 | EDD0796B | |
組織型纖溶酶原激活物（t-PA）抗體（貨號：EKY1204A）-羧基磁珠濃縮液 | DKY1328A | |
纖溶酶原激活物抑制劑-I(PAI)抗體（貨號：EKY1205A）-吖啶酯濃縮液 | DKY1328B | |
纖溶酶原激活物抑制劑-I(PAI)抗體（貨號：EKY1204B）-吖啶酯濃縮液 | DKY1328C | |
組織型纖溶酶原激活物抗體（貨號：）-羧基磁珠濃縮液 | DKY1328D | |
組織型纖溶酶原激活物抗體（貨號：）-堿性磷酸酶濃縮液 | DKY1328E | |
羧基磁性微球，1.2μm | DEG0800D | |
AMPPD 發(fā)光底物液（即用型） | DCD0517B | |
重組堿性磷酸酶（高活性） | DCE0108L | |
磁珠標記物稀釋液（化學發(fā)光） | DCD0532A | |
堿性磷酸酶（ALP）標記物稀釋液（化學發(fā)光） | DCD0533A |
